产品货号：
KD2066
中文名称：
Hoechst33342/PI细胞凋亡染色试剂盒
英文名称：
Hoechst33342/PI Apoptotic stain Kit
产品规格：
100T
发货周期：
1～3天
产品价格：
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产品内容：
产品简介：
Hoechst 33342/PI双染试剂盒(Hoechst 33342/PI Double Stain Kit)采用Hoechst 33342和碘化丙啶(PI)双染的方法以区分凋亡细胞和坏死细胞的试剂盒。
其检测原理是：细胞核荧光染料Hoechst 33342可以穿透细胞膜，嵌入双链DNA后释放蓝色荧光。对于正常细胞，其可少许进入细胞膜使其染上低蓝色。而凋亡细胞由于细胞膜通透性增强，从而使得进入凋亡细胞内的Hoechst 33342明显多于正常细胞，荧光强度比正常细胞要高。另外，细胞发生凋亡时染色质会固缩，从而使得染料能更有效和聚集的结合于DNA，并且凋亡细胞膜上的p-糖蛋白泵功能受损而不能有效的将Hoechst 33342排除到细胞外使其在细胞内的积累增加，这些特征都使得凋亡细胞经染色后荧光会比正常细胞明显增强。但细胞核荧光染料PI不能穿透细胞膜完整的正常细胞或凋亡细胞，即活细胞对PI染料拒染。而对于坏死细胞，其细胞膜的完整性在早期即已丧失，可被PI染色。
操作步骤：
一步法染色
1.每个样品收集约10～100万细胞于1.5mL离心管内，离心弃上清。细胞沉淀用0.8～1mL细胞染色缓冲液重悬。
2.加入5μL Hoechst 33342染色液。
3.加入15μL PI染色液。
4.混匀，冰浴或4℃孵育20～30min。
5.观察与分析。
两步法染色
1.每个样品收集约10～100万细胞于1.5mL离心管内，离心弃上清。细胞沉淀用0.8～1mL细胞染色缓冲液重悬。
2.加入5μL Hoechst 33342染色液，置于37℃孵育5～15min。
3.置于冰水浴中冷却后，4℃ 1000g离心3～5min，吸除上层染色液。
4.加入0.8～1mL细胞染色缓冲液重悬细胞沉淀。
5.加入15μL PI染色液，置于冰浴或4℃，孵育5～15min。
6.观察与分析。
注意：对于贴壁细胞可以胰酶消化，PBS洗涤后收集细胞沉淀后再进行染色。
染色结果观察
1.荧光显微镜观察：
如果使用荧光显微镜检测，检测前离心沉淀细胞，用PBS洗涤一次，再涂片观察红色荧光和蓝色荧光。对于贴壁细胞使用荧光显微镜检测，可以不收集细胞，弃培养液，之后用PBS洗涤细胞一次，弃PBS洗涤液。然后直接依次按照上述比例加入细胞染色缓冲液、Hoechst 33342染色液和PI染色液冰浴或4℃染色20～30min。染色后PBS洗涤一次，然后在荧光显微镜下观察。
2.流式细胞仪分析：
用流式细胞仪在激发波长400～500nm检测蓝色荧光，在大于630nm处检测红色荧光，同时检测光散射情况。采用适当分析软件进行细胞DNA含量分析和光散射分析。流式细胞仪的散点图上，可分为三群细胞，分别表现为：正常细胞为低蓝色/低红色(Hoechst33342+/PI+)，凋亡细胞为高蓝色/低红色(Hoechst33342++/PI+)，坏死细胞为低蓝色/高红色(Hoechst33342+/PI++)。
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